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C18液相色谱柱使用说明
发布时间:2019-10-09 22:44:25
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  2)使用缓冲盐,用过渡流动相或者低比例有机相反向冲洗柱子10-20个柱体积去除缓冲盐,用80%甲醇或80%乙腈反向冲洗色谱柱10-20个柱体积,保存柱子;

  3)使用离子对试剂,用过渡流动相或者低比例有机相反向冲洗柱子10-20个柱体积去除缓冲盐,再用50%甲醇反向冲洗柱子10个柱体积,最后用80%甲醇反向冲洗色谱柱10-20个柱体积,保存柱子。

  正相使用(正相色谱柱正相使用)清洗方法:

  分析结束后,用异丙醇反向冲洗10~20个柱体积再换正己烷反向冲洗柱子10-20个柱体积,保存柱子。

  色谱柱的异常维护(按照日常维护冲洗方向)

  1、柱压升高

  是每个色谱工作者都很敏感的问题,长时间使用造成柱压的缓慢升高通常是正常现象;短时间甚至是突然的柱压升高通常是异常升高,排除仪器的故障,确定是色谱柱自身原因,一般有以下几点:

  1)柱头的过滤筛板污染(固体颗粒物堵塞、强保留物质累积):

  解决方法:

  a、样品和流动相上机前请使用正确的过滤膜过滤;

  b、在柱前端加上在线过滤器或保护柱,用甲醇/水=20/80 分析流速反向冲洗色谱柱40倍柱体积;

  c、可将柱头打开,将色谱柱头中过滤筛板取出,在稀硝酸溶液内超声清洗20min,纯水超声清洗20min,最后用甲醇超声洗20min,重新装入色谱柱;

  2) 柱头填料污染(固体颗粒物堵塞、强保留物质累积):

  解决方法:

  a、用可以溶解污染物的溶剂较长时间(40倍柱体积)反向冲洗色谱柱;

  b、可将柱头打开,小心取出被污染的填料,用相同的填料重新装入修复;

  3) pH使用不当造成的损伤:

  解决方法:pH使用不当造成固定相的缺失或塌陷,很难使色谱柱恢复,只能更换色谱柱。

  2、推荐使用保护柱和在线过滤器:

  样品和流动相中不能完全过滤掉及泵磨损、密封圈和管路老化产生的固体颗粒物,进入到色谱柱中就会堵塞筛板,导致柱压升高,柱效下降,保护柱和在线过滤器上都有筛板,孔径与分析柱的孔径相同,能阻止颗粒物到达色谱柱,在分析故障中,柱压升高占很大比例,因此建议您在色谱柱前端加上在线过滤器或者保护柱。

  3、正确使用缓冲盐:

  缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,其使用不当会析出,加快泵柱塞杆和密封圈,流通阀的磨损,堵塞色谱柱头筛板、填料基质上的微孔和颗粒间的间隙,使填料板结柱压升高,阻碍基质上键合相的碳链自由舒展,使色谱柱保留能力下降,柱效降低,缩短其使用寿命,缓冲盐析出后很难去除,因此正确的使用缓冲盐对延长色谱柱的使用寿命非常重要,具体方法如下:

  “使用前过渡! 使用后冲洗!”

  分析前用过渡流动相冲洗柱体积5~10个柱体积,分析完成后按照色谱柱日常维护2)项处理;

  过渡流动相:有机相和水相的比例和分析流动相中两相比例一致,或者水相比例高于分析流动相,绝对不含缓冲盐。

  缓冲盐析出处理方案:

  1)方案1:用甲醇/水=10/90以分析速度流速35℃条件下反向冲洗色谱柱40个柱体积;

  2)方案2:用甲醇/水=10/90以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。

  4、避免强保留物质在色谱柱保留:

  强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积,是一个缓慢的过程,一段时间后会对样品成分产生额外的保留行为,引起峰变宽,拖尾,使柱效下降,保留时间变化,到一定程度时会导致柱压升高,对许多样品特别是复杂样品很难判断其是否含有强保留物质,因此要预防这一切的方式,坚持每天分析完成后用80%甲醇或80%乙腈反向冲洗色谱柱20个柱体积以上。

  但若长时间没有反向冲洗的柱子,请谨慎反冲

  注意:不要轻易打开柱头,因为柱头一旦打开,很难恢复到新柱的水平,因为柱头打开而造成的后果,客户自行负责。

  附加1. 溶剂互溶表

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