非常感谢您购买我司 HuaXue-Bio系列液相色谱柱产品,为了保证色谱柱能够发挥最高性能和保持更长的寿命,我们建议您在使用前仔细阅读本说明书
色谱柱安装与维护:
一. 安装
1、拆开柱包装盒,确认色谱柱的类型、规格、出厂日期以及柱内贮存的溶剂(出厂保存溶剂请见检测报告流动相)。
2、拧下柱两端的密封堵头放回包装盒备用。
3、按柱管上标示的流动相流向,将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接,柱的出口与检测器连接。
4、将“连接管路的不锈钢或者其它材质的接头”旋入色谱柱两端,管路接头要和色谱柱接口连接紧密,确保零死体积连接,在色谱仪正常运行时没有漏液。
色谱柱的正确使用:
色谱柱是昂贵的色谱耗材,正确的使用和维护对保证色谱柱的正常使用和延长寿命至关重要。
1.新反相色谱柱的平衡:
新反相色谱柱:用纯甲醇或者纯乙腈冲洗色谱柱30个柱体积(1个柱体积=空柱管体积×0.7),再更换成能与检测流动相互溶的溶剂冲洗30个柱体积,最后用流动相稳定系统至基线平稳;
新的正相色谱柱:反相使用异丙醇低流速(0.2ml/min)冲洗30个柱体积;正相使用采用正己烷分析流速冲洗30个柱体积,再更换成能与检测流动相互溶的溶剂冲洗30个柱体积,最后用流动相冲洗稳定系统至基线平稳待检测;
2、色谱柱的使用方向:
高效液相色谱柱标签上的箭头方向为流动相流向,使用过程时按此方向连接出入口,避免双向混用,导致两端填料同时污染,不利于色谱柱的再生和维护;
3、 流动相和样品保持洁净:
由于悬浮在样品或流动相中的细小颗粒会堵塞色谱柱两端的筛板,各种试剂尽量使用色谱纯级的,用量少的试剂纯度至少是分析纯,水建议是超纯水和全玻璃器皿双蒸水,使用前建议用0.45μm的滤膜过滤;样品溶液使用针头式过滤器;
样品中的杂质是造成色谱柱污染、柱效下降的最主要原因之一,复杂样品可选样品预处理柱(固相萃取小柱)进行前处理,如果不方便处理,建议使用与分析柱相匹配的保护柱。样品溶剂与流动相要相匹配,不能出现样品溶剂与流动相不互溶,极性相差太大等现象,否则会造成色谱峰形变差,鬼峰等现象,使用流动相溶解样品能有效的避免上述情况发生;
4、 色谱柱允许使用的pH范围:
每款色谱柱都有自己特定允许使用的pH范围,请仔细对照您的色谱柱的使用pH范围(表一),在pH范围以外使用,会使硅胶基质溶解或键合相水解,对色谱柱造成不可恢复的损伤,如果在临界pH处使用,分析结束后立即用适合于色谱柱保存并与当前使用的流动相互溶的淋洗液置换掉。
表一 HuaXue-Bio系列色谱柱pH耐受范围
柱型号 |
WD-C8、WD-C18 |
AQ-C18 |
WD-SiO2 |
pH范围 |
1.5-10.0 |
1.5-10.0 |
2.0-8.0 |
色谱柱的保存:
色谱柱按平时维护程序冲洗至基线平稳,反相色谱柱保存在不含有缓冲盐、离子对试剂的有机相/水溶液中,有机相不低于20%; 反相色谱柱保存在80%甲醇或80%乙腈水溶液中,若长期保存色谱柱反相柱建议使用纯有机溶剂保存,并将随柱的塑料堵头旋紧密封。
正相色谱柱正相使用保存在纯正己烷中, 若正相柱换相使用时(反相条件)使用时需将柱内存储液用异丙醇置换,最后用正己烷保存;最好将色谱柱从仪器上取下,并将随柱的塑料堵头旋紧密封。
色谱柱的日常维护(推荐反向冲洗):
反相使用(包括反相色谱柱和正相色谱柱反相使用)清洗方法:
1)未使用缓冲盐,分析完成后用80%甲醇或80%乙腈反向冲洗色谱柱10-20个柱体积,保存柱子;