黄曲霉素简介
黄曲霉毒素(AFT)是一种毒性很强的肝毒素, 可引起肝脏的急慢性损害， 同时还对肾脏等其他多种组织器官造成影响, 并具有致癌、致畸、致细胞突变的作用。 ATF广泛存在于玉米、麦类、稻谷等农产品以及坚果、花生和动物饲料中，近年来, 有陆续报道我国中草药材上ATF污染也很严重,。
为此，我国不断扩大对中药材中黄曲霉含量的检测领域，并制定相关检测标准以加强对中药材的质量管控。
、
黄曲霉毒素总量的测试方法
实验耗材： HuaXue-Bio 黄曲霉总量免疫亲和柱（货号：AFMT103）
参照标准：《中国药典2015年版第四部》
实验部分
一、样品提取
准确称取5.0 g粉碎后决明子样品置于50mL离心管中，加入1 g氯化钠，加入25 mL 70%甲醇溶液，于涡旋仪上涡旋2min，在5000 r/min下离心5min，取5 mL上清液，用水定容至20 mL，过滤，取10 mL待净化。
二、免疫亲和柱净化
(1) 上样：将20 mL上样器连接于免疫亲和柱上端，取待净化液以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。
(2) 淋洗和洗脱：用20 mL水淋洗柱子，分两次淋洗，弃去流出的液体；抽干小柱；加入2×1 mL甲醇洗脱，抽干小柱，收集洗脱液。
(3) 重新溶解：洗脱液在45℃氮吹至近干，0.5 mL初始流动相复溶，混匀，经0.22 μm滤膜过滤，供上机测试。
三、仪器条件
仪器测试条件（仅供参考）
3.1 液相条件
| 仪 器：UPLC/MS/MS (Thermo Fiaher TSQ Endura ) |
进样量： 4 μL |
| 色谱柱：CommaSilTM HILIC(2.1mm×100 mm, 3 μm) |
柱 温： 30 ℃ |
| 流动相：A：10 mmol/L 乙酸铵溶液 B：乙腈 |
流 速： 0.3 mL/min |
表1 梯度洗脱
| 时间/min |
A% |
B% |
| 0 |
90 |
10 |
| 3 |
60 |
40 |
| 4.5 |
55 |
45 |
| 6.5 |
35 |
65 |
| 10 |
60 |
40 |
3.2质谱条件
| 离子源：HESI，正离子监测 |
电喷雾电压：3500 V |
| 鞘气压力：2 arb |
辅气压力： 1 arb |
| 离子传输管：275℃ |
辅气温度：350℃ |
| 采集方式： 多反应监测(SIR) |
|
四、实验结果
表2. 决明子中0.02 mg/kg黄曲霉B1,黄曲霉G1和0.007mg/kg黄曲霉B2,黄曲霉G2的添加回收结果
1决明子中的黄曲霉B1
图1. 添加水平为0.02 mg/kg决明子中的黄曲霉B1检测的LCMS/MS色谱图
2决明子中的黄曲霉 B2
图2. 添加水平为0.007 mg/kg决明子中的黄曲霉B2检测的LCMS/MS色谱图
3决明子中的黄曲霉G1
图3. 添加水平为0.02 mg/kg决明子中的黄曲霉G1检测的LCMS/MS色谱图
4决明子中的黄曲霉G2
图4. 添加水平为0.007 mg/kg决明子中的黄曲霉G2检测的LCMS/MS色谱图’
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